Biblioteca rápida do ADN da construção da biblioteca de GDSBio NGS mais o jogo da preparação para MGI
Detalhes do produto:
Lugar de origem: | China |
Marca: | GDSBio |
Certificação: | ISO9001, ISO13485 |
Número do modelo: | KM004-A, KM004-B |
Condições de Pagamento e Envio:
Quantidade de ordem mínima: | 1 caixa |
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Detalhes da embalagem: | o pacote pequeno ou o volume distribuem ou OEM |
Tempo de entrega: | 8 dias do trabalho |
Termos de pagamento: | L/C, D/A, D/P, T/T, Western Union, MoneyGram |
Habilidade da fonte: | 10000 caixas/caixas pelo dia |
Informação detalhada |
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Conservado em estoque: | sim | Gato. Não.: | KM004-A, KM004-B |
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Especificação: | Rxns KM004-A/24; Rxns KM004-B/96 | Aparência: | líquido claro |
Logo Printing: | Com Logo Printing | Pacote do transporte: | Embalagem |
Vida útil: | 12 meses | Condições de armazenamento: | Loja na temperatura ambiente (15-25°C) e transporte na temperatura ambiente. |
Realçar: | Jogo ácido nucleico viral da extração do RNA,Jogo ácido nucleico viral da extração do ADN,Jogo da extração do RNA do cotonete |
Descrição de produto
Biblioteca rápida do ADN mais o jogo da preparação para MGI
[Nome do produto]
Biblioteca rápida do ADN mais o jogo da preparação para MGI
[Gato. Não/especs.]
Rxns KM004-A/24; Rxns KM004-B/96; rxns do saco 6 da amostra
[Descrição do produto]
Visando a alto-taxa de transferência de MGI que arranja em sequência a plataforma, este jogo fornece um esquema de construção conveniente e universal da biblioteca do ADN em um tubo. Combina a fragmentação, o reparo do fim e a Um-pedra saliente em uma etapa, encurtando extremamente a época da construção da biblioteca e reduzindo o erro causado por etapas fastidiosas. Após a fragmentação e a preparação da extremidade, o produto pode diretamente ser ligado com o adaptador sem purificação adicional, e o procedimento subsequente é o mesmo que aquele do jogo rápido da preparação da biblioteca do ADN #KM001 para MGI. A quantificação completa da biblioteca pode ser executada pelo método da tintura fluorescente do dsDNA (por exemplo, Qubit Thermo Flex Fluorometer) ou pelo PCR absoluto da quantificação após ter diluído a biblioteca a uma concentração apropriada.
[Tipo da amostra]
Entradas recomendadas da tabela 1 para o ADN comum
Aplicação | Tipo da amostra | Uma quantidade recomendada |
Arranjar em sequência inteiro do genoma | Genomas complexos de alta qualidade | 50ng-1μg |
Arranjar em sequência da captação do alvo do exome inteiro | Genomas complexos de alta qualidade | 10ng-1μg |
Arranjar em sequência da captação do alvo do genoma inteiro | ADN DE FFPE | ≥50ng |
Arranjar em sequência inteiro do genoma | Genoma microbiano | 1ng-1μg |
[Condição de armazenamento & vida útil]
Todos os reagentes devem ser armazenados no amortecedor da ligadura de -20°C. são normais para que os cristais precipitem em baixas temperaturas, ele devem ser equilibrados à temperatura ambiente antes de usar. O produto é válido por 12 meses.
[Componentes]
Componente | 24 rxns | 96 rxns |
Amortecedor de FEP | μl 120 | μl 480 |
Mistura da enzima de FEP | μl 240 | μl 2×480 |
Ligase rápida do ADN | μl 120 | μl 2×240 |
Amortecedor rápido da ligadura | μl 600 | μl 4×600 |
Mistura mestra do PCR da biblioteca 2× DE ALTA FIDELIDADE | μl 600 | μl 4×600 |
Mistura da primeira demão para MGI * | μl 120 | μl 480 |
Amortecedor da neutralização | μl 120 | μl 480 |
O amortecedor de *FEP é o amortecedor da reação da fragmentação e da preparação da extremidade. A mistura da enzima de FEP é uma mistura da enzima relativa à fragmentação e à preparação da extremidade.
* se há mais de uma amostra, a mistura da primeira demão do adaptador #KM002 e #KM003 está recomendada. Este jogo fornece um grupo de primeiras demão, a sequência da primeira demão é como segue:
5' - TGTGAGCCAAGGAGTTG-3
5' - GAACGACATGGCTACGA-3
Nota: grânulos recomendados da seleção: Grânulos da seleção Magbeads ou do AMPure XP do ADN de #NC1011 GDSPure.
[Notas]
1. Nós oferecemos dois tipos de primeiras demão universais do adaptador ajustadas (adaptador de GDS, #KM002 e #KM003, comprados separadamente), mas os clientes podem igualmente escolher de outros fabricantes ou sintetizar seu próprio adaptador para o MGI que arranja em sequência a plataforma. Demasiado adaptador conduzirá à formação de dímero do adaptador, e o insuficiente adaptador conduzirá à baixa saída da biblioteca. Consequentemente, a concentração apropriada do adaptador determina a concentração e a qualidade da biblioteca. As concentrações recomendadas do adaptador para quantidades diferentes de entrada do ADN são mostradas na seguinte tabela:
Concentrações recomendadas do uso da tabela 2 de adaptador
O ADN entrou | Concentrado recomendado para o adaptador | Adaptador: Relação de toupeira da inserção | Diluição Degrees* do adaptador de GDS |
1μg | 10μM | 10:1 | Nenhuma diluição |
500ng | 10μM | 20:1 | Nenhuma diluição |
250ng | 10μM | 40:1 | Nenhuma diluição |
100ng | 7.5μM | 100:1 | 3:4 |
50ng | 5μM | 200:1 | 1:2 |
25ng | 2.5μM | 200:1 | 1:4 |
1ng | 1μM | 200:1 | 1:10 |
* expressado como a relação do volume do adaptador ao diluente
2. A enzima usada na mistura mestra do PCR da biblioteca 2× DE ALTA FIDELIDADE é uma polimerase de ADN da família de B, que tenha 5" - 3" polimerase e 3" - 5" atividades do exonuclease, mas falta 5" - 3" atividades do exonuclease. Tem a alta fidelidade e a homogeneidade, e a capacidade sustentável forte da síntese. O controle restrito do número de ciclos da amplificação é particularmente importante para a saída da biblioteca. A seguinte tabela mostra o número recomendado de ciclos da amplificação que correspondem às quantidades diferentes de entrada do ADN:
Número recomendado da tabela 3 de ciclos da amplificação que correspondem às entradas diferentes da amostra
ADN entrado | Número recomendado de ciclos da amplificação | |
biblioteca 100ng | biblioteca 1μg | |
1μg | 0 | 2-5 |
500ng | 0 | 2-5 |
250ng | 1-3 | 5-7 |
100ng | 2-4 | 6-8 |
50ng | 4-6 | 8-10 |
25ng | 5-7 | 9-12 |
10ng | 7-9 | 11-13 |
5ng | 9-11 | 13-14 |
2.5ng | 10-12 | 14-16 |
1ng | 11-13 | 15-17 |
Nota: 1. A tabela acima mostra os resultados da análise usando 150bp o ADN padrão, que é para a referência somente.
2. Se os conectores incompletos são usados, um número mínimo dos ciclos (1-3) deve ser amplificado para obter uma biblioteca completa.
3. Se a qualidade do ADN da entrada é pobre, ou a seleção de tamanho está realizada durante a construção da biblioteca, o número de ciclos da amplificação deve apropriadamente ser aumentado.
[Processo padrão da construção da biblioteca]
Reparo da fragmentação e do fim
1. Determine a composição solvente do ADN do molde, se nenhum EDTA, continue diretamente pisar 2; Se o EDTA é contido, os grânulos 2.2× magnéticos devem ser usados para a purificação, ou um volume correspondente de amortecedor da neutralização deve ser adicionado de acordo com o índice do EDTA na seguinte tabela para a neutralização:
O EDTA concentrado. | Volume de amortecedor da neutralização |
1mM | μl 5 |
0.8mM | μl 4 |
0.6mM | μl 3 |
0.5mM | μl 2,5 |
0.4mM | μl 2 |
0.2mM | 1 μl |
0.1mM | 0,5 μl |
<0> | 0 μl |
2. Prepare a seguinte reação em um tubo do PCR de 200 μl:
Reagentes | Volume |
ADN entrado | Μl x |
Amortecedor de FEP | μl 5 |
Amortecedor da neutralização | Μl de Y |
ddH2 O | Ao μl 65 |
3. Adicione 10 a mistura da enzima do μl FEP ao sistema, ao sopro uniformemente, ao centrifugador acima posto momentaneamente, e imediatamente no instrumento do PCR para a seguinte reação:
Temperatura | Tempo |
20°C | 15min |
37°C | Consulte para apresentar 4 |
65°C | 15min |
4°C | ∞ |
Tempo de armazenagem da tabela 4 exigido para obter bibliotecas de tamanhos diferentes
Tamanho do fragmento | Tempo |
150bp | 20-30min |
250bp | 15-20min |
350bp | 10-15min |
550bp | 6-10min |
Ligadura do adaptador
1. Continue com a reação da ligadura o mais cedo possível após a fragmentação e a preparação da extremidade.
2. Dilua o adaptador de acordo com a tabela 2.
3. Prepare o seguinte sistema de reação:
Reagentes | Volume |
acima dos produtos | μl 50 |
Amortecedor rápido da ligadura | μl 25 |
Ligase rápida do ADN | μl 5 |
Adaptador X para MGI | μl 5 |
ddH2 O | μl 15 |
Total | μl 100 |
4. Redemoinho delicadamente e rotação para baixo momentaneamente a misturar bem, centrifugar momentaneamente e recolher todo o líquido à parte inferior do tubo.
5. Execute a seguinte reação em um cycler térmico:
Temperatura | Tempo |
20°C | 15min |
4°C | ∞ |
Solução recomendada para a limpeza do PCR/seleção de tamanho (o volume magnético específico do grânulo deve ser ajustado de acordo com o tamanho da amostra real)
1. Prepare 100 produtos da ligadura do μl em um tubo de centrifugador apropriado.
2. Adicione o μl 100 de grânulos magnéticos resuspended da seleção do ADN à amostra. Delicadamente sopro com uma pipeta por 10 vezes (ou redemoinho para 30 s). Incube amostras para o minuto 5 na temperatura ambiente.
3. Coloque o tubo em uma cremalheira magnética apropriada para separar os grânulos do supernatant. Quando a solução for clara, para remover e rejeitar com cuidado o supernatant com uma pipeta (não rejeite grânulos).
4. Adicione o μl 200 do álcool etílico recentemente preparado de 80% ao tubo quando na cremalheira magnética. Incube na temperatura ambiente para 30 s, e para remover então e rejeitar com cuidado o supernatant (não perturbe grânulos).
5. Repita etapa 4 uma vez para um total de duas lavagens.
Nota: Seja certo remover todo o líquido visível após o segundo Washington.
6. O ar seca os grânulos até que a superfície dos grânulos magnéticos não tenha nenhum brilho óbvio quando o tubo estiver na cremalheira magnética com a tampa aberta.
Nota: Faça não overdry os grânulos, este pode conduzir a uma mais baixa recuperação do ADN. Quando os grânulos começam se rachar, estão demasiado secos.
7. Remova o tubo da cremalheira magnética. Adicione o amortecedor da eluição de 22 μl (Tris-HCl, pH8.0-8.5 de 10mM) ao tubo. Misture bem introduzindo com pipeta para cima e para baixo pelo menos 10 vezes ou em um misturador do redemoinho para 30 o S. incuba para o minuto 3-5 na temperatura ambiente.
8. Coloque o tubo na cremalheira magnética. Após o minuto 5 (ou quando a solução for clara), supernatant do μl de transferência 20 a um tubo novo. A seleção é terminada, e o ADN selecionado pode ser usado para experiências subsequentes ou ser armazenado em -20°C por muito tempo.
Amplificação da biblioteca
1. Prepare a seguinte reação em um tubo do PCR:
Reagentes | Volume |
Produtos da ligadura após a seleção da limpeza ou de tamanho | μl 20 |
Mistura mestra do PCR da biblioteca 2× DE ALTA FIDELIDADE | μl 25 |
Mistura da primeira demão para MGI | μl 5 |
Total | μl 50 |
2. Redemoinho delicadamente e rotação para baixo momentaneamente a misturar bem, centrifugar momentaneamente e recolher todo o líquido à parte inferior do tubo.
3. Execute a seguinte reação em um cycler térmico:
Temperatura | Tempo | Número de ciclo |
95°C | 3min | 1 |
98°C | 20sec |
Número apropriado seleto de ciclos de acordo com a tabela 3 |
60°C | 15sec | |
72°C | 30sec | |
72°C | 5min | 1 |
4°C | ∞ | - |
Solução recomendada para a limpeza do PCR/seleção de tamanho (o volume magnético específico do grânulo deve ser ajustado de acordo com o tamanho da amostra real)
1. Prepare 50 produtos da ligadura do μl em um tubo de centrifugador apropriado.
2. Adicione o μl 45 de grânulos magnéticos resuspended da seleção do ADN à amostra. Delicadamente sopro com uma pipeta por 10 vezes (ou redemoinho para 30 s). Incube amostras para o minuto 5 na temperatura ambiente.
3. Coloque o tubo em uma cremalheira magnética apropriada para separar os grânulos do supernatant. Quando a solução for clara, para remover e rejeitar com cuidado o supernatant com uma pipeta (não rejeite grânulos).
4. Adicione o μl 200 do álcool etílico recentemente preparado de 80% ao tubo quando na cremalheira magnética. Incube na temperatura ambiente para 30 s, e para remover então e rejeitar com cuidado o supernatant (não perturbe grânulos).
5. Repita etapa 4 uma vez para um total de duas lavagens.
Nota: Seja certo remover todo o líquido visível após o segundo Washington.
6. O ar seca os grânulos até que a superfície dos grânulos magnéticos não tenha nenhum brilho óbvio quando o tubo estiver na cremalheira magnética com a tampa aberta.
Nota: Faça não overdry os grânulos, este pode conduzir a uma mais baixa recuperação do ADN. Quando os grânulos começam se rachar, estão demasiado secos.
7. Remova o tubo da cremalheira magnética. Adicione o amortecedor da eluição de 22 μl (Tris-HCl, pH8.0-8.5 de 10mM) ao tubo. Misture bem introduzindo com pipeta para cima e para baixo pelo menos 10 vezes ou em um misturador do redemoinho para 30 o S. incuba para o minuto 3-5 na temperatura ambiente.
8. Coloque o tubo na cremalheira magnética. Após o minuto 5 (ou quando a solução for clara), supernatant do μl de transferência 20 a um tubo novo. A seleção é terminada, e o ADN selecionado pode ser armazenado em 2-8°C por 1-2 semanas ou ser armazenado em -20°C por muito tempo.
[Apêndice] esquema recomendado para seleção frente e verso
Se a seleção dobro-redonda é exigida, nós fornecemos o seguinte esquema para selecionar o volume magnético apropriado do grânulo de acordo com o tamanho previsto da biblioteca. A seleção de tamanho pode ser executada antes do reparo do fim ou após a amplificação. Uma seleção dois ou dobro-mais redondos reduzirá extremamente o rendimento da biblioteca.
Encha o volume da biblioteca na tabela abaixo ao μl 100. Selecione o volume de grânulos magnéticos em dois círculos de acordo com o tamanho previsto da biblioteca. E realize a operação da seleção de acordo com as seguintes instruções.
Uma quantidade recomendada da tabela 5 de grânulos magnéticos para a seleção Dobro-redonda
Tamanho previsto da biblioteca | 150bp | 200bp | 250bp | 300bp | 400bp | 500bp | 600bp | 700bp | |
Volume de grânulos (μl) | Círculo 1 | 100 | 90 | 80 | 70 | 60 | 55 | 50 | 45 |
Círculo 2 | 30 | 20 | 20 | 20 | 20 | 15 | 15 | 15 |
1. Encha o volume da biblioteca ao μl 100 em um tubo do PCR 200μl e etiquetado como A. Adição algum volume de grânulos magnéticos de acordo com a tabela 5 (círculo 1) ao sopro de A. Delicado do tubo com uma pipeta para 30 S. incuba amostras para o minuto 5 na temperatura ambiente.
2. Coloque o tubo A em uma cremalheira magnética apropriada para separar os grânulos do supernatant. Quando a solução é clara, remova com cuidado o supernatant a um tubo novo e etiquete-o como grânulos de B. Rejeição.
3. Adicione algum volume de grânulos magnéticos de acordo com a tabela 5 (círculo 2) ao sopro de B. Delicado do tubo com uma pipeta para 30 que o S. incuba amostras para o minuto 5 na temperatura ambiente. Coloque o tubo B na cremalheira magnética. Quando a solução for clara, para remover e rejeitar com cuidado o supernatant.
4. Adicione o μl 200 do álcool etílico recentemente preparado de 80% ao tubo B quando na cremalheira magnética. Incube na temperatura ambiente para 30 s, e para remover então e rejeitar com cuidado o supernatant (não perturbe grânulos).
5. Repita etapa 6 uma vez para um total de duas lavagens.
Nota: Seja certo remover todo o líquido visível após o segundo Washington.
6. O ar seca os grânulos até que a superfície dos grânulos magnéticos não tenha nenhum brilho óbvio quando o tubo B estiver na cremalheira magnética com a tampa aberta.
Nota: Faça não overdry os grânulos, este pode conduzir a uma mais baixa recuperação do ADN. Quando os grânulos começam se rachar, estão demasiado secos.
7. Remova o tubo B da cremalheira magnética. Adicione o amortecedor da eluição de 22 μl ao tubo. Misture bem introduzindo com pipeta para cima e para baixo pelo menos 10 vezes ou em um misturador do redemoinho para 30 o S. incuba para o minuto 3-5 na temperatura ambiente.
Nota: Se a captação visada não será executada, adicione o amortecedor da eluição (Tris-HCl de 10mM, pH 8.0-8.5) para a eluição. Se não, a água ultrapure esterilizada deve ser usada para a eluição.
- Tubo B do lugar na cremalheira magnética. Supernatant do μl de transferência 20 a um tubo novo.
Para o uso da pesquisa somente
GDSBio é uma empresa da alto-tecnologia que centra-se sobre a investigação e desenvolvimento, a produção e as vendas dos produtos de alta qualidade da ciência da vida. A empresa tem uma linha de produtos completa, com a tecnologia do PCR como o núcleo, centrando-se sobre o PCR geral, armazenamento quantitativo do PCR da fluorescência, do NGS, eletroforese ácida nucleica e outras tecnologias da biologia molecular, e desenvolveu reagentes moleculars da pesquisa, in vitro matérias primas diagnósticas moleculars, reagentes da extração ácida nucleica e da detecção e outros produtos.